Expression, production and charachterisation of plant produced deglycosylated Pfs48/45 varients

Abstract

Plasmodium falciparum, insanlık tarihindeki en ölümcül parazitlerden biridir ve bu nedenle, uzun vadeli stabiliteye sahip güvenli, düşük maliyetli ve yüksek verimli sıtma aşısı geliştirmeye acilen ihtiyaç vardır. Son zamanlardaki birçok çalışma, bitki bazlı geçici ekspresyon sisteminin, yüksek ekspresyon kapasitesine sahip değerli, rekombinant proteinlerin güvenli, hızlı ve ucuz üretimini sağlayan en ümit verici teknoloji olduğunu göstermiştir. Pfs48 / 45, bulaşma engelleme (TB) aşısının geliştirilmesinde önde gelen adaylardan biridir ve parazit fertilizasyonunda önemli bir rol oynar. Bitkide üretilmiş P. falciparum'un Pfs48 / 45 proteini, sıtmaya karşı güvenli, etkili ve düşük maliyetli bir aşı için TB aşısı adayı olarak büyük bir potansiyel olabilir. Pfs48 / 45 proteininin yedi potansiyel glikosilasyon bölgesi vardır ve Nicotiana benthamiana bitkilerinde eksprese edildiğinde anormal şekilde glikosile edilir. Son zamanlarda, anormal glikosilasyonu önlemek için, bakteriyel enzimler PNGase F veya Endo H ile ilgili hedef proteinlerin birlikte sentezlenmesiyle bitkilerde glikosile edilmemiş proteinlerin üretilmesi için bir strateji geliştirilmiştir (Mamedov vd. 2013, 2016, 2017). Bu çalışmada, Pfs48 / 45 proteininin glikosile edilmemiş varyantları, in vivo deglikosilasyon stratejisinde PNGase F veya Endo H kullanılarak N. benthamiana bitkisinde tasarlanmış, ifade edilmiş ve üretilmiştir. Pfs48 / 45'in glikosile edilmiş ve deglikosile edilmiş varyantları saflaştırılmış ve saflaştırılmış protein, bilinen bir TB antikoru olan bir konformasyonel spesifik Pfs48 / 45 monoklonal antikoru (MRA-26, IIC5-B10) kullanılarak karakterize edilmiştir. Glikosile edilmiş formun tersine, in vivo Endo H deglikosile edilmiş Pfs48 / 45'te üretilen bitkinin, PNGase F deglikosile edilmiş muadiline benzer bir şekilde, konformasyonel spesifik Pfs48 / 45 monoklonal antikoru tarafından tanındığını göstermekteyiz. Bu, bitki tarafından üretilen Pfs48 / 45 proteininin doğal Pfs48 / 45 üzerinde bulunan epitopları içerdiğini ve bu nedenle bir Pfs48 / 45 bazlı TB sıtma aşısının geliştirilmesi için büyük bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.