Chlamydomonas reinhardtii'de CopII vezikül altbirimi SEC24A insersiyonel mutantlarının genetik linkaj ve fenotipik analizleri

Abstract

Bu çalışmada model organizma olarak tek hücreli bir yeşil alg olan Chlamydomonas reinhardtii (C. reinhardtii) kullanılmıştır. Chlamydomonas Center'dan alınan ve SEC24A geni 3ˈUTR bölgesinde insersiyona sahip olan sec24a mutantı ile İleri Genetik (forward genetic) çalışması yapılmıştır. COPII kompleksinin oluşumunda bir dizi sitoplazmik protein görev alır ve minimal üç sitolozik bileşenden, toplamda 5 farklı proteinden oluşmaktadır. Bunlar; GTPase-Sar1, Sec23/Sec24 kompleksi ve Sec13/Sec31 kompleksidir. Hücre içi salgı yolağının COPII vezikülünde kargo tanıma ve taşımada görev alan SEC24 proteininden iki paralog bulunduran C. reinhardtii'de, SEC24A geni üzerinde çalışılmıştır. Yapılan biyoinformatik çalışmalar sonucunda C. reinhardtii'de bulunan SEC24A proteini en fazla Homo sapiens SEC24D proteinine benzerlik gösterdiği, SEC23 proteini ile bağlanma motifinin SEC24A protein sekansı üzerinde bulunduğu ve domain yapısını koruduğu belirlenmiştir. sec24a hücrelerinde generatif üreme aşamaları, zigot oluşumu ve mayoz bölünme gibi aşamalarda çok bariz bir anormallik görülmemiştir. Hücre yapısında farklılıklar gözlemlenmiştir. Arilsülfataz enziminin hücre dışına salınımında bir farklılık gözlemlenmezken, alkalen fosfataz enziminin hücre dışına salgılanmasında azalma tespit edilmiştir. Sonuçlar SEC24A'nın alkalen fosfataz enziminin sekretuar yolaktan dışarıya salgılanmasında görev alabileceğini göstermektedir. Bu konuda kesin bir sonuca varabilmek için ilerideki çalışmalarda mutanttan üçüncü geriye çaprazlama yapılarak projeni testi yapılacaktır.