İnsan spermatogonyal kök hücrelerinin devamlılığının ve ekspansiyonunun in Vitro koşullarda sağlanması

Abstract

Amaç: Spermatogonyal kök hücreler (SKH) spermatogenezin devamlılığını sağlarlar ve bu kök hücrelerin kaybı erkeklerde infertiliteye sebep olmaktadır. Bu nedenle bu hücrelerin elde edilip çoğaltılarak kök hücre terapisinde kullanımı büyük önem taşımaktadır. Literatürde insan spermatogonyal kök hücrelerinin (iSKH) tanımlanması ve in vitro koşullarda çoğaltılması ile ilgili kısıtlı çalışma bulunmaktadır. Çalışmamızda iSKH'lerinin farklı yöntemler ile izolasyonları ve çeşitli in vitro koşullarda kültüre edilmeleri sonrasında hayatta kalma ve çoğalma kapasitelerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Bu çalışmada FACS ile izole edilen SSEA4 ve THY1 belirtecini ekspre eden hücrelerin kök hücre fonksiyonlarının değerlendirilmesi amacı ile ksenotransplantasyon yapılmıştır. Ardından FACS ve MACS yöntemi ile izole edilen THY1+ destekleyici hücreleri varlığında MACS ile izole edilen ITGA6+ iSKH'leri kültüre edilmiştir. Kültür sonunda elde edilen UTF1+ hücre sayıları değerlendirilmiştir. Ayrıca iSKH'leri, tip I kollajen ile kültüre edilerek, sayıları ve bu hücrelerin in vitro hayatta kalmaları değerlendirilmiştir. Bulgular: FACS ile izole edilen SSEA4+/THY1- hücrelerin koloni oluşturma kapasitelerinin yüksek olduğu ve SSEA4-/THY1+ ve SSEA4-/THY1- hücrelerin koloni oluşturma kapasitelerinin düşük olduğu gözlenmiştir. FACS ve MACS yöntemleri ile izole edilen THY1+ hücrelerinin, ITGA6+ iSKH'lerinin in vitro hayatta kalımlarını desteklediği gösterilmiştir. Tip I kollajen ile kök hücre zenginleştirme yönteminin iSKH sayısını ve çoğalmasını arttırdığı gözlenmiştir. Sonuç: Çalışmamızda tip I kollajen ile zenginleştirilen iSKH'lerinin THY1+ destekleyici hücreleri ile kültüre edilmelerinin, bu hücrelerin in vitro hayatta kalımlarını desteklediği ilk kez gösterilmiştir. Bulgularımız, iSKH'lerinin ileride infertilite olgularında kök hücre terapisinde kullanılmaları açısından destekleyici sonuçlar ortaya koymuştur.