DR5’in hücre yüzeyi ifadesinde HUR ve VPS39’un rolünün araştırılması

Abstract

Amaç: TRAIL (TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand) ligandı TNF ailesine üye, reseptörlerine bağlandığında hücreyi apoptoza yönlendirebilen bir sitokindir. Apoptotik sinyal iletme yeteneğine sahip iki adet hücre yüzeyi reseptörü bulunmaktadır. TRAIL sinyal yolağına dair birçok nokta aydınlatılmış olmasına rağmen, reseptörlerin regülasyonu hala tam olarak anlaşılamamıştır. Kanser hücrelerini TRAIL aracılı apoptoza yönlendirebilmenin ilk koşulu DR4 ve DR5 reseptörlerinin hücre yüzeyinde ifade edilebilmesidir. DR4'ün plazma membranına taşınma mekanizması kısmen anlaşılmış olsa da, DR5'in hücre yüzeyine nasıl çıktığı bilinmemektedir. Yöntem: Tez çalışmasında LNCaP ve HeLa hücreleri anti-HuR ve anti-Vps39 siRNA ile transfekte edilerek bu hücrelerden sitoplazmik, nüklear ve plazma membran fraksiyonları elde edildi. Bu fraksiyonlarda Western Blot ve ELISA yöntemiyle DR5 reseptör miktarı tayin edilerek HuR ve Vps39 baskılanmasının DR5 seviyeleri üzerine etkileri değerlendirildi. Ayrıca, siRNA ile transfekte hücrelerin TRAIL-aracılı apoptoz ve nekroptoz seviyeleri ELISA tabanlı ticari bir kit aracılığıyla belirlendi. Bulgular: HuR proteininin baskılanması LNCaP hücre hattında DR5'in hücre yüzeyi ifadesini düşürmüştür. Western Blot ve ELISA (p=0,036) verileri bu sonucu doğrulamaktadır. Benzer bir sonuç HeLa hücre hattı için de geçerlidir. HuR baskılanması sonucu DR5 yüzey ifadesindeki azalmanın TRAIL aracılı apoptozu engellemesi sadece HeLa hücrelerinde gözlenmiştir. Vps39'un ise DR5'in yüzey ekspresyonunda etkili olmadığı, fakat baskılandığı durumda her iki hücre hattında da nüklear DR5 miktarını değiştirdiği anlaşılmaktadır. Sonuç: Sonuç olarak, HuR proteini DR5'in yüzey ifadesini etkilemektedir. Bu mekanizmanın daha ayrıntılı biçimde aydınlatılabilmesi için ise ileri araştırmalara ihtiyaç vardır.