Pichia pastoris alkol dehidrogenaz (ADH3) promotoru üzerine çalışmalar

Abstract

Pichia pastoris, biyoteknoloji, ilaç endüstrisi ve akademik araştırmacılar tarafından yaygın olarak tercih edilen ökaryotik bir ekspresyon sistemidir. Son zamanlarda, P. pastoris üzerine, hem endüstriyel ölçekte hem de araştırma laboratuvarları tarafından yapılan çok sayıda çalışma bulunmaktadır. Ancak, hala P. pastoris metabolizmasında açıklığa kavuşmamış veya tam olarak bilinmeyen mekanizmalar vardır. Bunlardan biri de etanol metabolizmasının düzenlenmesidir. P. pastoris'in etanol metabolizmasında rol alan başlıca ADH genleri önceki çalışmamızda tarafımızdan tanımlanmış ve karakterize edilmiştir. Bu genlerden, etanol tüketiminden sorumlu olduğu belirlenen ve etanol içeren besiyerinde yüksek seviyede ekspres olan ADH3 geninin promotoru üzerine moleküler düzeyde bir çalışma bulunmamakta ve ADH3 promotorunun regülasyonu bilinmemektedir. Bu çalışmada P. pastoris ADH3 promotorunda silme analizleri ile aktivasyonundan ve represyonundan sorumlu düzenleyici DNA bölgeleri araştırılmıştır. Promotor aktivitesini arttırıcı aktivatör bölgeleri ilave edilmesi ve promotor aktivitesini azaltıcı represör bölgelerin silinmesi ile beş farklı sentetik promotor oluşturulmuş ve en yüksek aktiviteye sahip sentetik promotor fermentör koşullarında doğal ADH3 promotoru ile karşılaştırılmıştır.