N. Benthamiana bitkisinin kurutulmuş yaprakların'da Bacillus Anthracis'in koruyucu antijeni'nin (PA83) deglikosile edilmiş ve mutant formunun stabilite ve fonksiyon aktivite değerlendirilmesi

Abstract

Şarbon, hem insanları hem de hayvanları etkileyen Bacillus anthracis bakterisinin kaynaklanan akut bir hastalıktır. B. Anthracis sporlarının üretimi ve salımı nispeten kolaydır. Gram pozitif bir bakteri olan Bacillus anthracis'den kaynaklanan bir zoonotik bir hastalıktır. Rekombinant protein üretimi için birçok farklı sistem vardır. Bunlardan bazıları maya, bitki, böcek, bakteri ve memeli hücre kültürleridir. Bitki ekspresyon sistemi diğer ekspresyon sistemlerine göre birçok avantaja sahiptir. Ökaryotik translasyon sonrası modifikasyon mekanizmasına sahip oldukları için geçici gen ifadesi metodu kullanılır ve istenilen protein çok kısa bir sürede üretilebilmektedir. Bu yaklaşımdan yola çıkılarak PA koruyucu antijeninin deglikozile çalışması yapılmıştır. Bu çalışmada N. benthamiana da deglikozile dPA83-E ve pGR-MQ2 ile infiltre edilen kurutulmuş yapraklar kullanıldı. Ve elde edilen dPA83-E ve pGR-MQ2 deglikozile edilmiş mutantının özelliklerini, N. benthamiana bitkilerinde eksprese kurutulmuş dPA83-E ve pGR-MQ2 birçok yönde stabilizasyon ve karakterizasyon çalışmaların da kullanılma ihtimalleri üzerinde çalışılmıştır. Bu çalışmalar; in vivo deglikozile edilmiş PA83-E ve mutasyona uğramış versiyonlarının N. benthamiana bitkisinde yapılan çalışmada, kurutulmuş örneklerinin western blot ile ekspresyon kontrolü ve kurutulmuş yapraktan proteini çözündürme ve ezme yöntemiyle elde edilmesidir. Bu sonuçların SDS-PAGE ve WESTERN BLOT analizi yapılmıştır. Bu çalışmanın sonunda elde edilen bulgularla stabilizasyon değerlendirmesi, birçok yönde stabilizasyon ve karakterizasyon çalışmaların da kullanılma ihtimalleri üzerinde çalışılmıştır. Tüm sonuçlar incelendiğinde, kurutulmuş yapraklarda protein değerlerinin yaklaşık 1 yıldan fazla stabil kaldığı gösterilmiştir.