İnsan epidermal büyüme faktörünün (HEGF) servikal karsinoma hücre dizileri ME180 üzerinde TNF-Alfa aracılı p53 indüksiyonuna etkisinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada insan servikal karsinoma hücre dizisi ME 180 kullanılarak, hücre çoğalmasının önemli bir inhibitörü olan p53'ün TNF-a aracılı indüksiyonuna insan epidermal büyüme faktörünün (HEGF) etkisi araştırıldı. TNF-a'nın ME180 hücrelerinde p53 ve p21 ekspresyonlarını zamana bağlı olarak yükselttiği, EGF ön uygulamasının ise TNF-a' nm bu etkisini baskıladığı Western blot yöntemiyle gösterildi. TNF ve EGF'in p53 ile p21 üzerindeki bu etkileri saptandıktan sonra hücre döngüsünün kontrolünden sorumlu bu iki protein ekspresyonunda meydana gelen değişikliklerin apoptosise neden olup olmadıkları araştırıldı. TNF-a'nm neden olduğu p53 ve p21 artışının bu hücreler üzerinde yüksek sitotoksisiteye neden olduğu, bunun sonucunda da hücrelerin apoptosise uğrayarak öldükleri saptandı. EGF ön uygulamasının TNF-a'nm neden olduğu p53 ve p21 artışım baskılayarak hücreleri TNF aracılı apoptosisden koruduğu gösterildi. EGF'nin bu koruyucu etkisini hangi protein kinazlar üzerinden gerçekleştirdiği MAPK, PI3 ve PKC inhibitörleri kullanılarak araştırıldı. Bu üç protein kinaz inhibitörü içinden sadece PKC inhibitörünün EGF'nin TNF-a aracılı p53 indüksiyonundan ve apoptosisden koruyucu etkisini bozduğu saptandı.ME180 hücrelerinin, on bir alt tipi olan PKC ailesinden hangilerini bulundurduğu PKC translokasyon deneyleri ile gösterildi. ME180 hücrelerinin PKC'nin sadece 7 alt tipini bulundurduğu saptandı. EGF uygulamasının bu 7 PKC alt tipi içinden ise sadece PKC-8'yı aktifleştirerek sitoplazmadan membrana translokasyonuna neden olduğu ve bu translokasyonun PKC inhibitörü tarafından engellediğini gösterildi. Elde edilen bu bulgulardan EGF'in ME180 hücrelerini TNF-a'nın neden olduğu p53 aracılı apoptosisden PKC-8'yı aktifleştirmek suretiyle koruduğu sonucuna varıldı.